John Hopkins wurde in Luton geboren und studierte von 1993 bis 1996 Englisch an der Universität Leeds. Als Student trat er der Theatergruppe der Universität bei und spielte in mehreren Stücken mit. Für seine Leistung in "A Short Play About Sex and Death" gewann er den "Sunday Times" Studenten-Schauspielerpreis. Mit diesen verstärkten schauspielerischen Referenzen wurde John an die London Royal Academy of Dramatic Arts aufgenommen, die er im Jahr 2000 abschloss. Fast unmittelbar danach wurde er von der renommierten Royal Shakespeare Company rekrutiert, mit der er von 2001 bis 2002 seine erste Spielzeit absolvierte. Zu dieser Zeit brachte ihm sein Aussehen Fernsehangebote ein, und nach kleineren Rollen in "Love in a Cold Climate" und "Trial and Retribution 7" erhielt und akzeptierte er die Rolle, durch die er für Nicht-Theaterbesucher am bekanntesten ist: als Sergeant Scott in der beliebten britischen Krimi-Fernsehserie "Inspector Barnaby". In der Saison 2005 kehrte er für die Spielzeit 2006-2007 nach London und Stratford-upon-Avon zur Royal Shakespeare Company zurück und spielte Cäsar gegenüber Patrick Stewart in "Antony and Cleopatra". Zu seinen jüngeren Bühnenrollen zählen Richard Hannay in Patrick Barlows komödiantischer Adaption von "The 39 Steps", Richard I in dem neuen Stück "Holy Warriors" im Shakespeare's Globe und Benedick in "Much Ado About Nothing", eine Darstellung, die The Guardian als Bestätigung dafür bezeichnete, dass Hopkins einer unserer besten Shakespeare-Schauspieler ist. Im Fernsehen spielte er einen Bösewicht in "Stan Lee's Lucky Man" und verkörperte Sir Francis Basset in zwei Staffeln des BBC-Dramas "Poldark". In einem Artikel der Times (London) aus dem Jahr 2020 wurde er als einer der "10 besten britischen Bühnenakteure" genannt.
